重要的确诊方法。根据细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学鉴定、动物接种等可综合
鉴定病原菌。目前，一些微量鉴定系统及自动化细菌培养与鉴定系统已经应用于临床细菌
感染性疾病的诊断，大大提高了检查报告的速度与准确性。
（二）病毒感染
病毒是只能在易感细胞内以复制方式进行增殖的非细胞型微生物，因此，其检验程序
不同于细菌。病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出，
以及特异性抗体的检测。临床医师根据流行病学资料、患者症状与体征综合判断可能为何
种病毒感染，留取适宜的标本送检。分离病毒首先要采集含足量病毒的临床标本，然后接
种到敏感动物、鸡胚或培养细胞，使其生长增殖，再加以鉴定。
细胞培养是最常用的病毒分离方法，细胞培养液是含血清、葡萄糖、氨基酸、维生素
的平衡溶液（pH7．2～7．4），并根据宿主细胞对病毒的敏感性和病毒的嗜性来选择适当的
组织细胞。病毒的最初鉴定可根据临床症状、流行病学特点、标本来源、易感动物范围、
细胞病变特征确定何种病毒。再在此基础上，对已分离的病毒和已知参考血清作中和试
验、补体结合试验、血凝抑制试验作最后鉴定。显微镜检查也是病毒实验诊断不可忽视的
手段，如光学显微镜检查感染组织或脱落细胞中的特征性病毒包涵体，电镜检查病毒颗粒
等，均是早期诊断手段之一。
病毒分离鉴定和血清学诊断一般需要较长时间，近年来发展起来的利用核酸杂交技术
和PcR技术检测标本中病毒核酸，或用免疫荧光标记技术、化学发光技术检测组织细胞
内的病毒抗原和胞外游离病毒抗原是一种快速的早期诊断手段，并明显优于显微镜早期诊
断手段。
（三）真菌感染
真菌是以腐生或寄生方式摄取养料的真核细胞型微生物。真菌的微生物学诊断手段主
要包括直接检查、培养检查、免疫学试验和动物试验。由于各种不同真菌一般具有各自的
典型菌落形态和形态各异孢子与菌丝，因此，形态学检查是真菌检测的重要手段。真菌能
在人工培养基上生长，培养温度25～28℃，深部真菌37℃，但其培养一代时间较长，分
离标本孵育至少4周，常采用点滴法、不锈钢小培养法，并在显微镜下直接观察经培养后
菌体在自然位置状态下的形态结构（菌丝和孢子），以利于真菌的菌种鉴定。真菌的抗原
检测只适合于检测血清中和脑脊液中隐球菌、念珠菌、荚膜组织胞浆菌。真菌的血清学诊
断适用于深部真菌感染的标本。基因组核酸电泳核型分析技术、随机引物扩增DNA多态
性（RAPD）技术、荧光定量PCR技术、rDNA序列测序、核酸杂交技术等是近年来发展
起来的可快速诊断真菌感染的新型手段，但这些方法自身还存在一些局限性，且不能帮助
判断检测的阳性结果是感染还是定植，在检测过程中易出现假阳性和假阴性等，因此，其
结果判读需要结合临床全面分析。
（四）寄生虫病
寄生虫是单细胞或多细胞体，当其侵入宿主后，可在宿主体内寄生、发育而导致感
染。寄生虫对人体都是有害的，所引起的感染性疾病统称为寄生虫病。寄生虫实验诊断是
诊断寄生虫的主要依据，实验诊断包括病原学诊断、免疫学诊断和其他实验室常规检查。
第九章 临床常见病原体检测
由于每种寄生虫均在其特定的生活阶段以一定方式排离宿主，以求得转换宿主个体而延续
宗系，因此，根据寄生虫生活史的特点，从病人的血液、组织液、排泄物、分泌物或活体
组织中检查寄生虫的某一发育虫期，这是最可靠的诊断方法，广泛用于各寄生虫病的诊
断。但是，病原学诊断方法检出率较低，对轻度感染需要反复检查，以免漏诊；而对于在
组织中或器官内寄生而不易取得材料的寄生虫，可考虑采用免疫学诊断方法。
免疫学方法诊断寄生虫在临床上广泛应用，除了经典的凝集试验、沉淀试验、补体结
合试验等，近几年建立的酶联免疫吸附试验（enzyme…一linked immlJnosorbent assa5r，ELISA）、
免疫酶染色试验（immI~noenzymic staining test，IEST）、免疫印迹试验（immunoblot，
west，ern blot）、免疫荧光法（immurlofhaoI‘es（：ent method，IF）等使试验的敏感性和特异
性大大提高。近年来国内外发展起来的高新技术方法，如DNA探针技术和PCR（聚合酶
链反应，polymei‘ase chain reac…tion，PCR）技术为寄生虫病的诊断或寄生虫分类提供新的
高敏感的检测方法，有广泛应用前景。
（五）其他病原体感染
1．支原体检测 支原体是一群介于细菌与病毒之间，可通过滤菌器、无细胞壁，能
在无生命培养基中生长繁殖的最小原核微生物。已知有50多种，其中14种有病原性。与
人类疾病有关的是肺炎支原体、唾液支原体、口腔支原体、人型支原体、发酵支原体和微
小株支原体。支原体因缺乏细胞壁，呈高度多形性，革兰氏染色不易着色，直接显微镜检
测一般无临床意义。分离培养是支原体感染的确诊依据。不同种支原体在培养基中生长速
度不一，如解脲脲原体和人型支原体生长较快，利用培养后所见的典型菌落形态可作出初
步鉴定，再以特异性抗血清作生物抑制试验或代谢抑制试验即可作出确诊。肺炎支原体和
生殖道支原体初次分离较慢，一般需10天左右才生长出“荷包蛋”状菌落，故而不适合
于临床快速诊断。DNA探针技术和荧光定量PCR技术目前已用于临床实验室的检测。
2．螺旋体检测 螺旋体是一群细长、柔软、运动活泼、呈螺旋状的微生物。将标本
置于暗视野显微镜下检查运动活泼、具有特殊形态的螺旋体具有诊断意义。除钩端螺旋体
外，其他螺旋体如梅毒螺旋体、伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体等尚不能人工培养，因而，
血清学诊断广泛应用于临床实验检测。显微镜凝集试验、间接凝集试验、酶联免疫吸附试
验检测患者血清中的特异性抗体是常用的血清方法。用性病研究实验室玻片试验
（vDRL）或快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）对梅毒患者血清进行过筛试验，出现
阳性者再用荧光密螺旋体抗体吸附试验（FTA—ABS）或抗梅毒螺旋体微量血凝试验
（MHA—TP）作确诊试验。PCR检测可快速检测出螺旋体特异核酸片段，目前，已逐步
成为常用的检测方法。
3．立克次体检测 立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，在形态结
构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似：具有细胞壁；以二分裂方式繁殖；含有
RNA和DNA两种核酸；由于酶系统不完整需在活细胞内寄生；对多种抗生素敏感等。立
克次体病多数是自然疫源性疾病，且人畜共患。取血液或组织进行立氏立克次体血清学试
验，分离培养和鉴定，通过荧光染色从皮肤或其他组织中找到病原体有助于确定诊断。血
清学诊断需取3份血清标本，即发病第1周、第2周、第4～6周。PCR通过检测立克次
体特异性核酸可进行早期诊断。外斐试验为非特异性血清学诊断试验，用于斑疹伤寒、斑
点热和恙虫病的确诊，特异性缸清学试验有免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验和补体结合
试验等。
4．衣原体检测 衣原体是不活动的专性细胞内寄生物，有化学上与革兰阴性菌相似
的细胞壁，具有核糖体，可出现胞质内包涵体。直接显微镜检查细胞质内的典型包涵体对
衣原体感染诊断有参考价值。衣原体的分离培养与病毒培养一样，在鸡胚卵黄囊内生长良
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好，还可采用动物接种和细胞培养法。过去采用传统的组织培养分离衣原体的方法，技术
难度大，特异性和敏感性均不理想，且费时费钱。目前应用较多的是荧光标记单克隆抗体的
直接荧光抗体法，可快速确定系何种血清型衣原体感染。DNA探针技术和荧光定量PCR技
术目前已经应用于衣原体疾病的诊断、流行病学调查和无症状衣原体携带者的诊断。
5．严重急性呼吸道综合征（SARS）病毒的检测 SARS俗称“非典型肺炎”。SARS
病毒属于单正链RNA病毒（positive single—strand RNA virus）。首例SARS病例于2002年
¨月报道，是冠状病毒科的一个新变种。随后，sARS病毒迅速波及全球，对全球人类形
成了严重的生命威胁。SARs的诊断主要依据流行病学史和各种实验室检查。目前，
sARS的实验室检测手段主要包括：①免疫学方法一一免疫荧光试验（IAF）和酶联免疫
吸附试验（EI．ISA）可在1～2h内快速检测sARs抗体。②基因检测方法——包括RT—
PcR、巢式RT—PCR（：rlested RT—PCR）和荧光定量PCR，其中，荧光定量PCR具有
灵敏度高、特异性强等特点，可进行病毒早期感染诊断，是SA．RS实验室诊断的重要手段
之一。③细胞培养——是鉴别SARs感染最为准确的一种方法，其培养宿主细胞为非洲绿
猴正常肾脏细胞（VER（）E6），可从电子显微镜下直接观察培养细胞中的病毒颗粒，因此
十分准确，但是，其技术难度高，操作复杂，所需时间长等限制了细胞培养用于大量检测
和快速诊断。
（六）实验结果分析和临床应用
各种实验诊断方法中，临床标本分离和培养的阳性结果最具有诊断价值。经病原体鉴
定，可明确诊断病原体的种，并可作药物敏感试验。然而，分离培养的阴性结果并不能完
全排除感染的可能。常因标本采集运送的不当，培养条件不适合，病原体为难培养菌或已
使用抗生素／抗菌素治疗的患者均会出现假阴性结果，尤其是标本直接涂片镜检见细菌而
培养阴性者需考虑是否为I。型细菌、厌氧菌或苛养菌。
病原体的抗原成分检测有助于早期诊断感染性疾病，阳性结果提示某种感染性病原体
的存在，但对于那些存在正常菌群的标本，需考虑共同抗原引起的交叉反应，必须在设有
严格对照试验和排除试验时，阳性结果才能作出正确判断。
核酸检测已成为现代感染性疾病早期诊断的可靠方法之一。由于PcR技术具有很高
的敏感性，影响因素多，容易出现假阴性或假阳性结果，因此，操作者应严格按照操作规
程和程序，设立阴性和阳性对照，避免结果出现误差。其阳性结果只能说明标本内有某种
病原体的核酸，但是否为现期感染病原体则难以肯定。血清学试验是目前应用最广泛的感
染性疾病检测方法。用已知特异性抗原检测患者体内存在的特异性抗体，以出现IgM抗
体或高效价IgG抗体为阳性判断结果有重要诊断意义，并可作出现期感染的结论。为排除
隐性感染或回忆反应，常需作双份血清抗体的动态检测。IgM检测不仅可作早期诊断，且
可区分为原发性感染或复发性感染，在检测时应注意排除类风湿因子的干扰。
第四节病毒性肝炎检测
病毒性肝炎主要有7型，即甲型（HA）、乙型（HB）、丙型（Hc）、�